Válaszoló: Rácz Kitti
Kérdések:
1. A Celluar Internalization mi is nagy vonalakban?
Ha magyarul kellene megfogalmaznom, azt mondanám, hogy sejtek által történő bekebelezés. Tulajdonképpen endocitózis, tehát az a folyamat, melyben egy sejt a környezetében található makromolekulákat, oldott anyagokat, szilárd részecskéket bekebelezéssel felveszi. A folyamathoz sejtvázra (citoszkeleton) van szükség, ezért kizárólag eukarióták képesek rá. Az endocitózis során a sejtmembrán betűrődik, majd lefűződik, így egy membránnal határolt terület, vezikula jön létre. Ezzel a külvilág egy darabja bekerül a sejt belsejébe, a citoplazmába. A felvett anyag típusa szerint két csoportra bontjuk az endocitózist:
- Fagocitózis a folyamat neve, ha nagy méretű (>2μm) szilárd anyagok, makromolekulák felvétele történik. (Természetesen, mivel a sejtek folyékony közegben élnek és onnét vesznek fel anyagokat, folyadék ilyenkor is kerül az endoszómába.)
- Pinocitózisról (sejtivás) beszélünk akkor, ha a sejt a környező folyadékot (például testfolyadék) veszi fel az abban oldott részecskékkel. Pinocitózisra gyakorlatilag minden sejt képes.
2. Az SSTR2 pozitivitás (érzékenység) honnan ismert egy tumorra? Mert ugye ehhez kötik a molekula használhatóságát. (Vagy kipróbáljuk, és vagy jó, vagy nem alapon megy?)
Egy tumor akkor SSTR2 pozitív, ha nagy mértékben expesszálja a szomatosztatin receptorok 2-es altípusát. A tumorok eme tulajdonságát kísérletesen kell meghatározni.
3. Milyen gyakoriak a szomatosztatin receptor-positive tumorok? Általánosan használt eljárás e receptor meglétének vizsgálata a tumorsejteken?
Nem tudom, hogy a diagnosztizált tumoroknak hány százaléka SSTR pozitív, de viszonylag elég gyakoriak.
Kimutatási módszerek:
- medulloblastoma recidívájának korai kimutatása Octreoscan-vizsgálat (pl: medulloblastoma recidívájának korai kimutatása)
-in vitro receptor-kötődés ([125I] MK-678)
-receptor gén-expressziós analízis
-immunhisztokémiai technikák, immunblot.
Legmagasabb eredmények: patkány AR42J hasnyálmirigy és az emberi kissejtes tüdőrák (SCLC) sejtvonalak.
4. Elméletben lehetséges a 64Cu-CB-TE2A-Y3-TATE egyidőben terápiás és diagnosztikus használata? (pl karcinoid tumorok)
5. Kell számolni valamilyen mellékhatással a hipofízisben megvalósuló uptake miatt?
Nem találtam rá adatot, hogy lenne emiatt mellékhatás.
6. Minden tumorsejt expesszál SSTR-t?
A legtöbb sejt expresszál valamennyit. De vannak tumorsejtek, melyek „overexpresszálják” a 2-es típust, ezek a SSTR2 pozitív tumokrok. És vannak olyanok melyek nem expresszálnak SSTR2-t jelentősebben, ezek a SSTR2 negatív tumorok.
7. Az altipusok tumor specifikusak?
Nem. Sok tumor expresszál SSTR-t, és a legtöbb többfélét egyszerre, de a 2-es altípus a leggyakoribb.
8. Hogyan végeztek a VRK-t?
Radio-vékonyréteg-kromatográfiát végeztek. Mint a HPLC-nél itt is fordított fázist alkalmaztak (módosított szilikagél: C18) állófázisként. A mozgófázis 10%-os ammónium-acetát és metanol 3:7 arányú elegye volt. A standard controll 64Cu izotóppal jelzett ecetsavanhidrid. A detektálást gamma- és béta számlálóval végezték.
9. Hogyan lehetne meg izotop komplex iránti affinitast mérni?
A legjobb módszerek a kromatográfiás eljárások:
Az ő másik módszerük erre a radio-HPLC volt: fordított fázis (C18-as oszlop), grádiens elúció(TFA-víz), radioaktív detektor, fotodiódás UV-detektor.
Mi a PB izotóp (tallium, technécium) iránti affinitását egyszerű papír-kromatográfiával vizsgáltuk.
10. Alkalmazható-e terápiában?
Az izotóp (64Cu) tulajdonságai alapján alkalmas (felezési idő: 12,7 óra, béta + és – sugárzó). Nem találtam arra vonatkozó utalást, hogy használják-e. A terápiás alkalmazásnak a gyors ürülés szabhat szerintem gátat. Én alkalmasabbnak látnám a jobban internalizálódó agonisták használatát a terápiában.
11. Az internalizáció miért lényeges kérdés?
Az internalizáció inkább a terápia miatt fontos, általa tovább marad fenn a radioaktivitás. A kezelés alapjául a daganatok jellegzetes szomatosztatinreceptor-expressziója és a ligand (szomatosztatin, illetve analógjai) kötődése után a szomatosztatinreceptor internalizálódása szolgál.
12. Mi az „elektrospray mass spectrometry”?
Elektro-porlasztásos tömeg spektometria. A tömegspektrometria vagy tömegspektroszkópia (MS - Mass Spectrometry) nagyműszeres analitikai módszer töltött anyagi részecskék tömegének meghatározására. Az adott ionok elektromágneses térrel való kölcsönhatásra tömeg/töltés hányadosuk alapján szétválnak valamilyen módon. A tömegspektrometria legfőbb felhasználása tiszta szerves komponensek képletének és a fragmentálódási folyamatok révén a vegyületek szerkezetének a meghatározására is. A tömegspektroszkópia nagy érzékenységű (akár fg!), széles tömegtartományú, jól reprodukálható, szelektív, valamint elválasztástechnikai módszerekkel, így például gázkromatográfiával (GC-MS), folyadékkromatográfiával (LC-MS) vagy kapilláris elektroforézissel (CE-MS) kombinálható a megfelelő interface hozzákapcsolásával. A mérés során felvesszük a tömegspektrumot, mely relatív intenzitást ábrázol a tömeg/töltés hányados függvényében. (Bővebben: http://hu.wikipedia.org/wiki/T%C3%B6megspektrometria)
Az elválasztás feltétele, hogy a mintánk gáz halmazállapotú és ionos legyen. Az ionizációt többféle módszerrel lehet megvalósítani: atmoszférikus nyomású kémiai ionizációval, gyors atom bombázással, vagy elektroporlasztásos ionizációval.
Az „elektrospray mass spectrometry”, tehát tulajdonképpen olyan tömegspektrometria, ahol az ionizációt elektroporlasztással végzik. http://en.wikipedia.org/wiki/Electrospray_ionization
13. Miért internalizálódik a SST2-ANT?
Mert köt egy olyan membrán-receptorhoz, ami utána lefűződik a citoplazmába.
14. Hogyan lehet figyelembe venni a nem receptor által szabályozott endocitózis?
Az elhanyagolható mértékű a receptor mediálthoz képest. A többi szövetre is jellemző, háttérként jelenik meg az intenzitásban.
15. A plazmamembrán újrahasznosításakor kötelezően bekerül a ligand a citoplazmába?
Ha a plazmamembrán lefűződik a sejtbe, vele együtt fűződik minden, amit épp kötnek a membrán-receptorok. Tehát, ha az adott ligand kötve van, bekerül a citoplamába.
16. Mi történik vele miután bekerül a citoplazmába? Hogyan ürül ki, ha kiürül a szervezetből?
Ezt még nem lehet tudni. Aki érdekel a SST2 receptor lokalizációja és internalizációjjának időbeli változása különböző sejtekben elolvashatja magyarul itt.
Köszönjük Kittinek az alapos munkát és a részletes diszkussziót. Örülök hogy sokan becsülettel végzik a kiadott feladatokat.
VálaszTörlés