Válaszoló: Hegedűs Nikolett
Rövid összefoglalás:
at=antitest
at=antitest
Sok technika ismeretes amivel at farmakokinetikáját lehet vizsgálni, de ezek nagy része ex vivo mérés. Pl: izotóppal jelölt antitest szervi eloszlásának vizsgálata boncolással, kvantitatív egész-test autoradiográfia, szövettan és szérum-koncentráció analízis (ELISA).
In vivo: dinamikus 2D-s gamma szcintigráfia (régebben), SPECT, CT (újabb)
A review a PET, SPECT, optikai képalkotás előnyeit, korlátait foglalja össze in vivo egér modellekben at farmakokinetikájának vizsgálata során.
Vizsgált paraméterek: érzékenység, felbontás, izotóp választás, jelölés, dozimetria
SPECT: hosszabb felezési idejű izotópokkal használatos
felbontása: 1 mm3, kivétel 125I: 1 mm3
kisállat vizsgálat során jobb a felbontása, mint a SPECT-nek
érzékenység a bomlások számától függ (Hány százalék ad gamma fotont, és ez mekkora energiát jelent?)
PET: térbeli felbontása jobb, mint a PET-nek(klinikumban)
Érzékenység függ a pozitron intenzitásától (nem minden bomlás eredményez pozitront)
Izotópok: SPECT: hosszabb felezési idő: 67Ga, 123I, 125I, 111In, 177Lu, 99mTc
PET: 64Cu, 18F , 68Ga, 123I
111In, 67Ga, 68Ga: alkalmas at jelölésre bifunkcionális kelátorok segítségével. Amin funkciós csoport szükséges hozzá.
123I, 124I,125I: direkt és indirekt úton lehet fehérjét jelölni.
99mTc: direkt és indirekt jelölésre alkalmas.
Izotópok esetén fontos a felezési idő:
Biológiai felezési idő
Fizikai felezési idő
Effektív felezési idő: teljes kiürülés időtartamát írja le.
A biológiai felezési idő az az idő, amely alatt a szervezetbe jutott vegyület mennyiségének fele anyagcsere révén kiürül. A spontán elbomló anyagok esetében (pl. radioaktív anyag) a biológiai felezési időhöz a fizikai felezési idő is hozzájárul, így a radioaktív és a biológiai aktivitás csökkenése a két folyamat hatására együttesen történik. A legjobban jellemző mennyiség ilyenkor az effektív felezési idő.
TE=TB*TF/(TB+TF)
Optikai képalkotás:
Az elektromágneses spektrum VIS tartományának IR tartományhoz közel eső tartományát vizsgálják.
Lehet: biolumineszcencia, fluoreszcencia
Mélyen fekvő szövetek nehezen vizsgálhatók.
Előny: olcsó, könnyen kivitelezhető, biztonságos.
Kérdések:
1, Hogyan működik a méretkizárásos kromatográfia?
A méretkizárásos kromatográfia (angolul: size exclusion chromatography, rövidítve: SEC), melyet gél permeációs kromatográfiaként vagy gélszűréses kromatográfiaként is említenek, méret (vagy pontosabban hidrodinamikai átmérőjük vagy hidrodinamikai térfogatuk) alapján választja el a részecskéket. A kisebb molekulák képesek belépni az állófázis pórusaiba, így lassabban eluálódnak, míg a nagyobb molekulák ki vannak zárva a pórusokból így elúciójuk gyorsabb. Általában csak kis felbontás érhető el vele, ezért általában csak a tisztítás utolsó lépéseként használják. Hasznos még tisztított fehérjék harmadlagos vagy negyedleges szerkezetének meghatározásában. Az eljárást széleskörűen alkalmazzák poliszacharidok molekulatömegének meghatározására.
A méretkizárásos kromatográfia az Európai Gyógyszerkönyv által is előírt hivatalos módszer a kereskedelmi forgalomban beszerezhető különböző alacsony móltömegű heparinok molekulatömegének összehasonlítására.
A Biofizika könyv 560. oldalán is található egy jó leírás erről.
Átlagos dózisra eső kumulált aktivitás.
Kumulált aktivitás a kisállat által elnyelt dózis
S érték= átlagos dózis/ egységnyi kumulált dózis
4, Teff.= 34,7 h
A cikk azt írja, hogy 4* Teff ideig lehet mérést végezni. 34,7*4= 138 h 5,78 nap (kb. 6 nap)
Igaziból 5 felezési idő elteltével tekinthetjük kiürültnek a szert.
- fel.idő: 50%
- fel.idő: 25%
- fel.idő: 12,5%
- fel.idő: 6,25%
- fel.idő: 3,125%
5, Mit ért a szerző "ex vivo" vizsgálaton? Miben különbözik ez az in vitro vizsgálattól?
Ex vivo (Latin: "out of the living") = a szervezeten kívül "helyet foglaló" Ex vivo mérés azt jelenti, hogy a természetes körülmények minimális megváltoztatásával, mesterséges körülmények között történik a mérés. Ex vivo mérések lehetővé teszik több paraméter megváltoztatását, mint amire in vivo körülmények között lehetőség van. Elsődleges előnye a mérésnek, hogy olyan teszteket is végezzünk, amit élő állaton nem lenne etikus. A szöveteket többféle úton távolíthatják el: részletekben vagy akár az egész szervrendszert.
Az ex vivo nem egyenlő az in vitro-val, mert ebben az esetben sejtkultúrákat alkalmaznak.
Sejtbiológiában az ex vivo azt is jelentheti, hogy szervből/szervezetből szövetet vesznek ki és kultúrát létesítenek belőle.
6, 2. képsorozatban (nemspecifikus antitesttel injekciózott egér) egyáltalán miért kellene látni valamit? Vagy az csak "kontrollnak" van ott?
Az ex vivo nem egyenlő az in vitro-val, mert ebben az esetben sejtkultúrákat alkalmaznak.
Sejtbiológiában az ex vivo azt is jelentheti, hogy szervből/szervezetből szövetet vesznek ki és kultúrát létesítenek belőle.
6, 2. képsorozatban (nemspecifikus antitesttel injekciózott egér) egyáltalán miért kellene látni valamit? Vagy az csak "kontrollnak" van ott?
Véleményem szerint azok kontroll minták, hogy bizonyítsa van jelentősége a specifikus kötődésnek.
7, Úgy tudom, hogy az oxigén 15-ös tömegszámú izotópja is β+ sugárzó. Ezt vajon mért nem vették be a vizsgált elemek közé ebben a reviewban?
Az oxigén 15-ös izotópja valóban béta sugárzó aminek felezési ideje 122sec. Lehetséges, hogy ezt kevésnek találták a méréshez, mert a legrövidebb felezési idejű izotóp amit használtak 4060,8sec volt.
8, Van-e (lesz-e) lehetőség a SPECT/PET vizsgálatok időbeli felbontásának növelésére, hogy azok a folyamatok is vizsgálhatók legyenek, amelyek lefutása akár néhány perc (esetleg másodperc)?
Folynak vizsgálatok a mérési idő lerövidítésére. A detektor jelenleg 360 fokban forog (SPECT esetében) a minta körül, fokonként külön-külön felvételt készít és ehhez sok idő kell, ha igazán jó minőségű és felbontású 3D-s képet szeretnénk nyerni. Létezik olyan mérési elrendezés is amikor nem kell forognia a detektornak a Mediso NanoSPECT ezt is tudja. A PET detektorok nem forognak, de azok sem tudnak ennyi idő alatt megfelelő jelet begyűjteni. A perces felbontás jelenleg is létezik (ld: parotis projekt), de a másodperces felbontás szerintem jelenleg még nem reális de ennek tulajdonképpen csak a beadott izotóp aktivitás szab határt.
9, Miért nem használnak jelölésre hidrogént vagy oxigént izotóp gyanánt?
A hidrogén izotópok nagyon instabilak, legtöbbnek a felezési ideje 10-22 sec-os nagyságrendű. Az oxigén esetében is csak 3 izotóp mondható stabilnak.
10, Mi
A fluoreszencia spektrum a gerjesztés hatására bekövetkező fluoreszcencia emisszió intenzitásának a hullámhossztól való függését ábrázolja. Az alapállapot vibrációs szint rendszerét reprezentálja a fluoreszcencia spektrum ezért egyetlen sávból áll, amely kevésbé struktúrált, és az abszorpciós sávhoz viszonyítva eltolódik a spektrum vörös vége felé. Ez a Stokes-féle eltolódás.
11, Miért más a különböző pozitron emittáló izotópok esetén a pozitron által megtett átlagos úthossz?
A pozitronok energiája a forrás izotóp energiájától függ. Vagyis a belső magátalakulás energiaszintjei függnek a neuton és protonszámtól. Ezért a kijövő pozitron energia is más.
12, Miért csak az antitestes jelöléseket vizsgálták?
Különböző jelölt metabolitokkal is vizsgálhatók lennének ezek a biokémiai folyamatok.
A leggyakrabban használt FDG is egy cukorváltozat, de a cikk csak ezekre az antitestekre fókuszált.
13, Az optikai képalkotásban használt fluoreszkáló proteinek vagy más anyagok milyen idő és térbeli felbontás engedélyeznek és az in vivo történő képalkotással mennyire összeegyeztethetőek?
Az időbeli felbontás nem releváns.A fluoreszcens proteinek képződése (amelyet lehet RNS átírással vagy egyéb módon szabályozni) és a lebontása (intacellurális proteinek, fehérvérsejtek) a flourofór típusától függ (ha gerjesztő fényre is szükség van akkor kiégés is lehet, ha kemolumineszcencia akkor a gerjesztéshez szükséges molekula koncentráció stb.).
A térbeli felbontást tekintve a VIS fény erősen szóródik, tehát a lokalizáció nagyon
pontatlan, vagyis egérben 1-5 mm-nél jobb felbontás nem érhető el.
11, Miért más a különböző pozitron emittáló izotópok esetén a pozitron által megtett átlagos úthossz?
A pozitronok energiája a forrás izotóp energiájától függ. Vagyis a belső magátalakulás energiaszintjei függnek a neuton és protonszámtól. Ezért a kijövő pozitron energia is más.
12, Miért csak az antitestes jelöléseket vizsgálták?
Különböző jelölt metabolitokkal is vizsgálhatók lennének ezek a biokémiai folyamatok.
A leggyakrabban használt FDG is egy cukorváltozat, de a cikk csak ezekre az antitestekre fókuszált.
13, Az optikai képalkotásban használt fluoreszkáló proteinek vagy más anyagok milyen idő és térbeli felbontás engedélyeznek és az in vivo történő képalkotással mennyire összeegyeztethetőek?
Az időbeli felbontás nem releváns.A fluoreszcens proteinek képződése (amelyet lehet RNS átírással vagy egyéb módon szabályozni) és a lebontása (intacellurális proteinek, fehérvérsejtek) a flourofór típusától függ (ha gerjesztő fényre is szükség van akkor kiégés is lehet, ha kemolumineszcencia akkor a gerjesztéshez szükséges molekula koncentráció stb.).
A térbeli felbontást tekintve a VIS fény erősen szóródik, tehát a lokalizáció nagyon
pontatlan, vagyis egérben 1-5 mm-nél jobb felbontás nem érhető el.
Nincsenek megjegyzések:
Megjegyzés küldése